Biotinilación de proteínas

En Rekom Biotech hemos desarrollado una línea de proteínas monobiotiniladas, ofreciendo algunas de las referencias de nuestro catálogo con una biotina en su extremo C-terminal. Esta molécula permite la unión específica de las proteínas biotiniladas a la estreptavidina.

Nuestras proteínas monobiotiniladas están unidas a un BCCP-tag en el extremo C-terminal, con un residuo de lisina que es biotinilado enzimáticamente por la biotina ligasa BirA de E. coli. Esta técnica de marcado de un solo punto tiene muchas ventajas para los ensayos de unión más comunes:

  • La biotinilación solo ocurre en el residuo de lisina del BCCP tag.
  • No hay interferencia con las uniones de la proteína objetivo.
  • La orientación de las proteínas es uniforme cuando se inmoviliza sobre una superficie recubierta de estreptavidina, como las nanopartículas.

Echa un vistazo a nuestras proteínas monobiotiniladas y no dudes en ponerte en contacto con nosotros si necesitas cualquier cosa.

o
ENFERMEDAD/MICROORGANISMO NOMBRE REFERENCIAS DESCRIPCIÓN DETALLES

Babesiosis (o piroplasmosis) / Babesia canis

BcMSA1
RAG0020BIOT (biotinilado)
Antígeno de la superficie del Merozoito

Chagas / Trypanosoma cruzi

ChimChagas3
RAG0096BIOT (biotinilado)
Antígeno recombinante quimérico para detección de la enfermedad de Chagas

Infección por Citomegalovirus (CMV)

ChimCMV1
RAG0109BIOT (biotinilado)
Antígeno recombinante quimérico que contiene varios determinantes antigénicos para CMV
ChimCMV2
RAG0110BIOT (biotinilado)
Antígeno recombinante quimérico que contiene varios determinantes antigénicos para CMV
pp52
RAG0090BIOT (biotinilado)
Subunidad procesiva de la ADN polimerasa

Infección por el virus de Epstein-Barr (VEB)

p18
RAG0049BIOT (biotinilado)
Antígeno de la cápside del virus

Leishmaniasis / Leishmania infantum

K39
RAG0061BIOT (biotinilado)
Antígeno correspondiente la kinesina del parásito

Neosporosis / Neospora caninum

NcGRA7
RAG0024BIOT (biotinilado)
Antígeno GRA7 presente en los gránulos densos de Neospora caninum

Phleum pratense (Polen de gramíneas)

Phl p 5a
RAL0003BIOT (biotinilado)
Desconocido

Sífilis / Treponema pallidum

ChimSyphilis1
RAG0046BIOT (biotinilado)
Antígeno recombinante quimérico para Treponema pallidum
ChimSyphilis2
RAG0064BIOT (biotinilado)
Antígeno recombinante quimérico para Treponema pallidum
Tpp15
RAG0009BIOT (biotinilado)
Lipoproteína de membrana
Tpp17
RAG0008BIOT (biotinilado)
Lipoproteína de membrana
Tpp47
RAG0010BIOT (biotinilado)
Lipoproteína de membrana

Síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) / Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)

p24
RAG0057BIOT (biotinilado)
Antígeno de la cápside del virus

Triticum aestivum (Trigo)

Tri a 19
RAL0053BIOT (biotinilado)
Omega-5 gliadina, proteína almacenadora de semillas

Sistemas convencionales de conjugación

Proteína biotinilada
Figura 1. Proteína biotinilada

Por muchas razones, una proteína conjugada puede ser la solución a problemas diversos en el desarrollo de un test de diagnóstico. Un problema frecuente de la mayoría de las superficies es la desnaturalización de la proteína unida a ellas debido a la alta hidrofobicidad de estas. Además, debido a la proximidad de la superficie con estas moléculas suelen darse problemas de impedimentos estéricos en procesos de unión a otras moléculas como anticuerpos. Una orientación adecuada a la superficie puede incrementar la estabilidad de la proteína unida y puede también aumentar su sensibilidad si la molécula gracias a esta orientación expone sus regiones de unión.

Los métodos convencionales de conjugación generalmente funcionan bien con anticuerpos. Ssin embargo, los resultados obtenidos con proteínas son menos constantes, sobre todo en aquellos cuya estructura 3D no ha sido bien establecida. Esta es probablemente la principal razón por la cual los ELISAs Sándwich de Doble Antígeno (DAS) no son tan frecuentes en el mercado como los ELISAs indirectos.

Para evitar este efecto en la estructura de la proteína causada por los sistemas convencionales de conjugación que pueden disminuir la sensibilidad del DAS-ELISA, el uso de proteínas monobiotiniladas es perfecto.

¿Por qué usar nuestras proteínas biotiniladas?

La unión extremadamente específica y de alta afinidad entre la biotina y la avidina y/o estreptavidina (Kd ≈ 10-14M) da lugar a sistemas de detección de alta sensibilidad. Una ventaja clara es que, con sólo una estreptavidina conjugada con peroxidasa, podemos obtener conjugados complejos de todas nuestras referencias sin necesidad de peroxidar cada una..

La biotina va unida a un linker que la separa de la superficie de la proteína, evitando posibles impedimentos estéricos con las regiones antigénicas presentes en la superficie de la proteína. De esta manera, la interacción con el anticuerpo no se verá comprometida con la conjugación.

Interacción entre un antígeno y la región Fab de un anticuerpo
Figura 2. Interacción entre una proteína (verde) y la región Fab de un anticuerpo (rosa). En rojo se muestran los amino ácidos que generalmente son usados para llevar a cabo la conjugación de la molécula. Algunos de estos amino ácidos son parte de los epítopos de la proteína. Esta conjugación interferiría con la unión del anticuerpo, disminuyendo la capacidad antigénica de la proteína.

Al unir siempre una biotina por molécula de proteína, nuestras proteínas biotiniladas presentarán una mayor reproducibilidad y esto favorecerá a la reproducibilidad de los test de diagnóstico desarrollados con ellas.

Usos de las proteínas biotiniladas

Orientación de la proteína en placas recubiertas con estreptavidina
Orientación de la proteína en placas recubiertas con estreptavidina
Detección en ensayos de captura de IgMs
Detección en ensayos de captura de IgMs
Detección en ensayos DAS
Detección en ensayos DAS
Unión a oro y otras nanopartículas recubiertas con estreptavidina
Unión a oro y otras nanopartículas recubiertas con estreptavidina