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Bio-marcadores biotiniliados
Figura 1. Bio-marcador biotinilado
Por muchas razones, un bio-marcador conjugado puede ser la solución a problemas diversos en el desarrollo de un test de diagnóstico. Un problema frecuente de la mayoría de las superficies es la desnaturalización de la proteína unida a ellas debido a la alta hidrofobicidad de estas. Además, debido a la proximidad de la superficie con estas moléculas suelen darse problemas de impedimentos estéricos en procesos de unión a otras moléculas como anticuerpos. Una orientación adecuada a la superficie puede incrementar la estabilidad de la proteína unida y puede también aumentar su sensibilidad si la molécula gracias a esta orientación expone sus regiones de unión.
Los métodos convencionales de conjugación generalmente funcionan bien con anticuerpos, sin embargo, los resultados obtenidos con antígenos son menos constantes, sobre todo en aquellos cuya estructura 3D no ha sido bien establecida. Esta es probablemente la principal razón por la cual los ELISAs de sándwich de doble antígeno (DAS-ELISA) no son tan frecuentes en el mercado como los ELISAs indirectos.
Para evitar este efecto en la estructura del antígeno causada por los sistemas convencionales de conjugación que pueden disminuir la sensibilidad del DAS-ELISA, en Rekom Biotech hemos desarrollado una línea de bio-marcadores biotinilados, ofreciendo a nuestros clientes los mismos antígenos de nuestro catálogo, pero con una biotina en su extremo C-terminal. Esta molécula permite la unión específica de los antígenos biotinilados a la estreptavidina.
¿Por qué biotinilados?
La unión extremadamente específica y de alta afinidad entre la biotina y la avidina y/o estreptavidina (Kd ≈ 10-14M) da lugar a sistemas de detección de alta sensibilidad. Una ventaja clara es que, con sólo una estreptavidina conjugada con peroxidasa, podemos usar todas nuestras referencias en formatos de captura o inmunométricos sin necesidad de tener que conjugar todas ellas.
La biotina va unida a un linker que la separa de la superficie del bio-marcador, evitando posibles impedimentos estéricos con las regiones antigénicas presentes en la superficie del antígeno. De esta manera, la interacción con el anticuerpo no se verá comprometida con la conjugación.
Figura 2. Interacción entre un antígeno (verde) y la región Fab de un anticuerpo (rosa). En rojo se muestran los amino ácidos que generalmente son usados para llevar a cabo la conjugación de la molécula. Algunos de estos amino ácidos son parte de los epítopos del antígeno. Esta conjugación interferiría con la unión del anticuerpo, disminuyendo la capacidad antigénica del bio-marcador.
Al unir siempre una biotina por molécula de proteína, nuestros bio-marcadores conjugados presentarán una mayor reproducibilidad y esto favorecerá a la reproducibilidad de los test de diagnóstico de nuestros clientes.
Usos biotinilados
- Orientación del antígeno en placas recubiertas con estreptavidina.
- Detección en ensayos de captura de IgMs.
- Detección en ensayos DAS.
- Unión a oro y otras nanopartículas recubiertas con estreptavidina.
Bio-marcadores de Rekom Biotech biotinilados
| ENFERMEDAD/ALERGIA | NOMBRE | REFERENCIA | DESCRIPCIÓN |
|---|---|---|---|
| Citomegalovirus | ChimCMV1 | RAG0109BIOT | Antígeno quimérico recombinante que contiene varios determinantes antigénicos para CMV |
| pp52 | RAG0090BIOT | Subunidad procesiva de la ADN polimerasa | |
| Gramíneas (Phleum pratense) | Phl p 5a | RAL0003BIOT | Desconocido |
| Leishmania infantum | K39 | RAG0061BIOT | Antígeno correspondiente la kinesina del parásito |
| Sífilis | ChimSyphilis | RAG0046BIOT | Quimera recombinante para Treponema pallidum |
| Tpp15 | RAG0009BIOT | Lipoproteína de membrana | |
| Tpp17 | RAG0008BIOT | Lipoproteína de membrana | |
| Tpp47 | RAG0010BIOT | Lipoproteína de membrana | |
| Trigo (Triticum aestivum) | Tri a 19 | RAL0053BIOT | Omega-5 gliadina, proteína almacenadora de semillas |
| Virus del Epstein-Barr | p18 | RAG0049BIOT | Antígeno de la cápside del virus |
